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分析洗滌在ELISA過程中的重要性
點擊次數(shù):2251 更新時間:2021-01-26
  洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,卻是決定成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用屬普遍性的,因此在ELISA測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附,在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。
  洗滌如不*,特別在后一次,如有酶結(jié)合物的非特異性吸附,將使空白值升高。另外,在間接法中如血清標本內(nèi)的非特異性lgG吸附在固相上而未被洗凈,也將與酶標抗抗體作用而產(chǎn)生干擾。
  ELISA板的洗滌一般可采用以下步驟:①吸干反應液;②將洗滌液注滿板孔;③放置2~3min,略作搖動;④吸干孔內(nèi)液。也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為3~4次,有時甚至需洗5~6次。
  洗滌方法可用手動或全自動沖洗,不論使用哪種方法,都要滿足下列條件:①每個孔都應充滿洗滌液;②每步?jīng)_洗后都要*去凈洗滌液;③沖洗次數(shù)要足夠;④足夠的浸泡時間。.
  一般情況下,浸泡時間長和增加沖洗次數(shù)可以降低相對標準偏差(RSD),但過度沖洗則降低陽性血清與陰性血清的吸光度比值,在自動沖洗時常有此種現(xiàn)象。當用自動注意沖洗器的管是否有堵塞。如果用自動或半自動沖洗器,在沖洗過程中可以觀察到酶標板,從而可以保證洗滌的效果。
  洗滌液中的成分不同也會影響ELISA檢測結(jié)果。洗滌液可以是:(1)蒸餾水;(2)水+0.05%Tween20;(3)蒸餾水+0.5%BSA;(4)蒸餾水+0.05%Tween20+0.5%BSA。結(jié)果表明洗滌液中加Tween20和BSA時洗滌的效果相同,同時使用Tween20和BSA對檢測結(jié)果并無明顯改善,但僅用蒸餾水洗滌時會使弱陽性血清反應轉(zhuǎn)為陰性。

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